microRNA Isolation Kit——分離miRNA或靶mRNA的新工具
近年來(lái)，microRNA(miRNA)成為生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的明星。雖然只有22個(gè)左右的堿基，但是在基因表達(dá)調(diào)控中起著至關(guān)重要的作用，參與細(xì)胞分化、個(gè)體發(fā)育，且與多種疾病相關(guān)。因此對(duì)于miRNA的研究越來(lái)越多。傳統(tǒng)的miRNA分離方法是結(jié)合了基于酚/胍的樣品裂解和硅膠膜離心柱，直接將總RNA分離出來(lái)，不能直接分離出miRNA。
Wako的miRNA純化試劑盒能夠制備高純度的miRNA片段，在細(xì)胞中，成熟的miRNA分子可與Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默復(fù)合體(RISC)，此純化試劑盒利用免疫沉淀方法，與Ago蛋白結(jié)合抗體的特異性，分離miRNA。純化的miRNA片段含有非常少的rRNA和tRNA降解片段。與傳統(tǒng)的miRNA純化方法相比，有效提高了miRNA的克隆效率。純化的miRNA可用于分析miRNA的靶mRNA。
n  特點(diǎn)
1)      內(nèi)源性Ago蛋白的免疫沉淀
2)      高度純化與Ago蛋白結(jié)合的miRNA
3)      其他RNAs的污染少，比如rRNA & tRNA
4)      純化的microRNA片段可用于高效的microRNA克隆和微陣列
5)      可同時(shí)分離miRNA和靶mRNA，便于直接進(jìn)行后續(xù)的靶mRNA的克隆和定量分析
 

與常規(guī)方法比較

	常規(guī)方法	Wako的新方法
總RNA提取	需要	不需要
小RNA (≦200nt)的純化
變性PAGE電泳
從變性PAGE凝膠中進(jìn)行凝膠抽提
從變性PAGE膠中進(jìn)行凝膠純化
rRNA片段污染率	高	低
tRNA片段污染率	高	低
操作時(shí)間	≦12小時(shí)	≦4小時(shí)

使用例1：
圖1：使用microRNA Isolation Kit,Human Ago2純化microRNA片段
從培養(yǎng)的人類(lèi)細(xì)胞系（HeLa,HepG2,HEK293）中純化的microRNA片段用Urea-PAGE和銀染方法（Wako Cat. No. 311-03961；CLEAR STAIN Ag）檢測(cè)。每個(gè)細(xì)胞系的數(shù)目大約是5×106。上樣量是用該試劑盒純化后獲得的5ul microRNA溶液（制備的溶液一般是10ul）。

  siRNA藥理研究
將小分子干擾RNA（siRNA）直接注入細(xì)胞中，這些siRNA結(jié)合蛋白元件，也可形成RISC，此試劑盒也可純化與Ago2結(jié)合的siRNA，便于后續(xù)的siRNA研究分析。因此此試劑盒不僅能分離miRNA，亦可作用于siRNA，大大拓寬了試劑盒的使用范圍。
 
后續(xù)研究：
1）RNAi的抑制效果
2）siRNA的藥代過(guò)程
3）體內(nèi)siRNA的穩(wěn)定性
4）毒性/副作用
5）對(duì)于非特異性mRNAs的脫靶效應(yīng)

 
貨號(hào)               品名                                              規(guī)格
 291-70201microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1 10tests      
292-66701 microRNA Isolation Kit, Human Ago2 10tests    
292-67301 microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2     10tests    
297-70301 microRNA Isolation Kit, Human Ago3 10tests  
290-66501 microRNA Cloning Kit 8tests    
298-65103 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution                  200units   
292-65101 Single Strand DNA Ligase, Thermostable, recombinant, Solution                          500units  
298-67901 PCR Purification Kit            30tests 
298-68001 Target mRNA Cloning Kit            10tests

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